高效液相色譜具有高壓、高效、高速、高靈敏度、高選擇性等特點,廣泛應用于醫(yī)藥、環(huán)保、石化、食品、化工等行業(yè),是現(xiàn)在分離分析的重要方法,本文著重介紹HPLC的工作原理、基本組成及高效液相色譜名詞術語,使新學者快速了解高效液相色譜知識,在日常操作中理論與實踐結合,確保HPLC的高效運行、快速分析。
高效液相色譜由溶劑輸送系統(tǒng)(脫氣機、高壓泵等)、進樣系統(tǒng)(定量泵、六通閥、定量環(huán)、進樣針等)、分離系統(tǒng)(色譜柱等)、檢測系統(tǒng)(檢測器等)、記錄及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
高壓輸液泵:將流動相在高壓下連續(xù)不斷地送入液路系統(tǒng),具有有足夠的壓力,輸出流量恒定、可調(diào),輸出壓力平穩(wěn),泵室體積小,泵體抗腐蝕、耐酸等特點。
在線脫氣機:四元低壓系統(tǒng)屬于泵前混合,由于在常壓下混合,極易產(chǎn)生氣泡,必須配有在線脫氣機,并要求流動相使用前進行脫氣。
進樣系統(tǒng):分為手動進樣系統(tǒng)和自動進樣系統(tǒng), 主要由定量環(huán)、六通閥、進樣針等部件組成。手動進樣系統(tǒng)的定量環(huán)用于準確定量,分為5μl、10μl、20μl等,需要根據(jù)不同進樣量選擇合適的定量環(huán);自動進樣系統(tǒng)儀器自帶定量環(huán)多為100μl,如進樣量大于定量環(huán)體積需咨詢相應儀器工程師更換定量環(huán)及計量泵等,六通閥是理想的進樣部件,由圓形密封墊(轉子)和固定底座(定子)組成,通過閥切換保證恒定的流速。
分離系統(tǒng):包括色譜注、柱溫箱,連接管線等部件。
色譜柱一般用內(nèi)部拋光的不銹鋼制成。其內(nèi)徑為2~6mm,柱長為10~50cm,柱形多為直形,內(nèi)部充滿3~10 μm高效微粒固定相,根據(jù)不同的實驗需求需要選擇不同填料、不同規(guī)格的色譜柱。
柱溫箱:保證分離系統(tǒng)的溫度恒定,降低溫度波動對色譜基線、保留時間及色譜分離的影響,包括普通柱溫箱及帶有冷卻功能的柱溫箱,普通柱溫箱可以根據(jù)方法需求設定高于室溫的溫度(一般應高于室溫5℃以上),降低柱壓或是改善色譜分離。
以上就是高效液相色譜結構的一些介紹,供大家參考!